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mg132前沿信息_mg132泛素化wb(2024年12月实时热点)

内容来源：方新你好影院所属栏目：教程更新日期：2024-11-29

mg132

c-FLIP作为细胞凋亡过程中的关键负调控因子，在细胞凋亡通路中起着至关重要的作用。第一步，THC抑制下游分子c-FLIP的蛋白水平 WB检测显示，THC显著降低TNBC肿瘤组织和细胞中c-FLIP蛋白水平（图1a-b）。功能实验表明，沉默c-FLIP增强了THC在TNBC细胞中的生长抑制作用和凋亡（图1c-e）；而过表达c-FLIP则减弱了这些作用（图1f-h）。表明THC通过抑制TNBC中c-FLIP来诱导细胞凋亡的外源性途径。第二步，THC主要通过泛素-蛋白酶体途径促进TNBC中c-FLIP的降解根据RT-qPCR和WB分析显示，THC显著降低TNBC中c-FLIP（基因名：CFLAR）蛋白水平，不影响CFLAR mRNA水平（图1b和1i）。众所周知，细胞内蛋白质降解通常遵循两种主要途径：自噬和泛素-蛋白酶体系统。研究发现，自噬抑制剂如3-MA、Baf A1和CQ并没有显著改变THC诱导的c-FLIP蛋白表达（图1j）。而蛋白合成抑制剂CHX单独处理导致c-FLIP蛋白水平下降；添加THC后，进一步降低了c-FLIP蛋白水平；重要的是，这种下降可以通过MG132逆转，表明THC通过TNBC细胞中的泛素-蛋白酶体途径促进c-FLIP的降解（图1k）。此外，Co-IP实验分析发现，THC可增强c-FLIP的泛素化（图1l）。表明，THC主要通过泛素-蛋白酶体途径促进TNBC中c-FLIP的降解。全文分享请查阅：【《J Adv Res》解读：药物单体机制怎么做？四氢姜黄素靶向TRIP13促进c-FLIP泛素化降解抑制乳腺癌进展】。 #泛素化#⠯𛿣科研#⠯𛿣研究生#⠯𛿣wb实验# #

CHX+MG132，追踪蛋白降解大家好，今天我想和大家分享一下我最近在做的一个实验——用CHX和MG132来追踪底物蛋白的降解。这个实验虽然有点复杂，但真的很有趣，让我对蛋白质降解的机制有了更深的理解。 CHX和MG132的基本概念 𐟌🊊首先，让我们来了解一下这两种药物。CHX（环乙酰亚胺）是一种常用的蛋白质合成抑制剂。它的作用机理是阻止真核生物核糖体的转位，从而停止蛋白质的合成。CHX在研究蛋白质降解、半衰期和转化率方面非常重要。而MG132则是一种有效的、可逆的并且能渗透细胞20S蛋白酶体的抑制剂。它的作用是阻止蛋白质的降解，从而让我们能够观察到底物蛋白的降解动力学。实验步骤 𐟧ꊊ好了，了解了这些基本概念后，我们来看看具体的实验步骤吧：准备工作首先，我们需要确保细胞在六孔板的密度达到70%以上，这样才能保证后续的Western blot（WB）分析能够顺利进行。药物配制接下来，我们需要配制药物。MG132的浓度是40，CHX的浓度是20/ml。如果你还想加入其他药物，记得明确剂量哦。设置条件组然后，我们需要设置好条件组。举个例子，我们可以设置以下几种条件：①CHX处理 ②CHX+MG132处理 ③CHX+目的药物处理 ④CHX+MG132+目的药物处理。时间点收集最后，我们在每个条件组中分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h和24h收集细胞，并进行蛋白质提取。实验结果 𐟓Š 通过这个实验，我们可以观察到不同时间点下，底物蛋白的降解情况。通过WB分析，我们可以看到蛋白质表达水平的变化，从而可视化蛋白质降解的动力学。个人小结 𐟓 这个实验虽然有点繁琐，但真的很有价值。通过CHX和MG132的处理，我们可以更深入地了解蛋白质降解的机制。希望我的分享能对大家有所帮助！如果你有任何问题或想法，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

第一步，确定调节YBX1表达的潜在机制---泛素-蛋白酶体降解途径为了进一步确定调节YBX1表达的潜在机制，泛素-蛋白酶体降解途径和自噬-溶酶体途径是细胞内蛋白质降解的两种重要途径。用MG132、3MA和CQ处理原代神经元（3MA是一种广泛使用的抑制细胞自噬的抑制剂，可抑制III类PI3K；CQ通过增加酸性内体/溶酶体的pH值来破坏溶酶体功能；MG132是一种广泛使用的泛素-蛋白酶体降解途径抑制剂。），发现MG132处理后，YBX1的表达水平升高（图2a）。表明泛素-蛋白酶体降解途径可能是YBX1在神经元中的主要调节机制。第二步，确定TRIM56与YBX1相互作用 IP-MS和分子对接分析显示，E3泛素连接酶TRIM56与YBX1强结合（图2b-e）。细胞水平内源性、外源性Co-IP实验证实TRIM56与YBX1相互作用（图2f-h）。另外，Co-IP实验分析发现，在SCI模型小鼠和OGD处理过的神经元中，TRIM56的表达及其与YBX1的结合均减少（图2i-j）。表明TRIM56与YBX1之间存在相互作用。第三步，确定TRIM56与YBX1相互作用的结合区域构建一系列截短的Myc标签YBX1载体，进行Co-IP实验，以确定YBX1 TRIM56特异性结合的区域。Co-IP结果显示，TRIM56仅与YBX1的M3(26-324)片段结合（图2k-l）。表明TRIM56与YBX1之间存在直接相互作用。全文分享请查阅：【《Adv Sci》解读：泛凋亡！TRIM56调节YBX1泛素化降解，改善脊髓损伤中ZBP1介导的神经元PANoptosis】。如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #科研#⠂ #泛素化修饰#⠂ #研究生日常#⠂ #实验室日常#

✨【科研动态】急性淋巴细胞白血病（ALL）是常见的儿童癌症之一，而最新研究发现，MG132可能为这一病症带来新的治疗希望。你知道吗？研究显示MG132能够抑制细胞增殖，并诱导癌细胞的凋亡，这一过程是通过影响Akt/FOXO3a/Bim信号通路实现的！在这项研究中，MG132通过抑制Akt磷酸化，促进了FOXO3a在细胞核中的定位，进而导致Bim蛋白的表达增加，最终实现对癌细胞的抑制。𐟑颀𐟔쨿™意味着，MG132不仅在实验室中显示出强大的抗白血病效果，在动物模型中同样能够显著抑制肿瘤生长，预示着它有可能成为治疗ALL的新策略。 𐟌ˆ【未来畅想】这样的发现为我们指明了新的治疗方向，即便当前的治疗模式已相对成熟，MG132或许能为抵抗复发性和难治性白血病提供一条新的出路！同时，研究还发现，FOXO3a的缺失会显著减弱MG132的抗增殖效应，这进一步说明了其潜在的重要性。 𐟒᤽ 觉得MG132能否最终成为ALL治疗的游戏规则改变者呢？或者你对其机制有什么独到见解？欢迎在评论区分享你的看法！#抗癌#,#白血病#,#新药研发#

《Adv Sci》解读：circNOLC1如何增强PPP？ ChIRP-MS和RNA pulldown-WB实验，发现AZGP1, DSG1和KRT16证明与circNOLC1存在互作（图1a-c）。因AZGP1在CRC中高表达，且在葡萄糖代谢中发挥重要作用，故将其作为研究对象。RIP实验发现circNOLC1在anti-AZGP1下拉物中显著富集（图1d）。为了确定circNOLC1与AZGP1互作区域，设计circNOLC1缺失突变体，进行RNA pulldown实验，表明circNOLC1的nt 91-150是circNOLC1与AZGP1相互作用必需的（图1e）。进一步检测发现，circNOLC1仅调控AZGP1蛋白水平，用蛋白酶体抑制剂处理细胞显示MG132显著提高AZGP1蛋白水平，暗示circNOLC1阻碍AZGP1蛋白降解（图1f）。此外，功能回复实验结果表明circNOLC1通过AZGP1激活mTOR/SREBP/G6PD信号通路来增强PPP（图1g和h）。文献解读全文分享可查阅：【《Adv Sci》解读：极为少见！CircNOLC1同时与AZGP1和miR-212-5p结合调控促进结直肠癌肝转移】。基云专注互作机制研究，如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #科研#⠣研究生#⠣RIP实验#⠂ #CHIRP实验#⠣ RNA pulldown实验

热门辅酶Q10推荐！快来看看哪款适合你身体是革命的本钱，心𐟫€的保养也不能忽视。适当服用辅酶Q10可以帮助养护身体。辅酶Q10就像身体的能量，为身体充电。市面上辅酶Q10产品众多，宣传也五花八门，不知道如何选择？以下是我多年服用辅酶Q10的经验分享，希望能帮助大家找到适合自己的产品！ ◆自然之宝辅酶Q10 辅酶Q10含量：200mg/1粒剂型：软胶囊特点：吸收性好，适合体质较弱的人、运动小白和短期熬夜党。 ◆万益蓝辅酶Q10 辅酶Q10含量：150mg/1粒添加：20mg足量PQQ 其他成分：黑胡椒提取物特点：辅酶吸收率提升至132%，适合需要提高辅酶吸收的人群。 ◆PoemCare辅酶Q10 辅酶Q10含量：100mg/1粒添加：燕窝酸特点：成分温和，容易被吸收，适合敏感人群。 ◆信心康乐辅酶Q10 辅酶Q10含量：200mg/1粒剂型：小胶囊特点：橄榄油基地油，安心不致敏，适合备孕期的准妈妈和准爸爸们。这些产品中，万益蓝的辅酶含量适中且添加了足量PQQ，非常适合经常熬夜的人群。我每天随餐服用一粒，现在已经推荐给父母一起服用了。好好养护身体，才能更好地工作！

MG132在急性淋巴细胞白血病中的新突破

MYH10去泛素化SNAIL蛋白为了明确MYH10在SOC细胞中的作用机制，利用Biogrid分析发现SNAIL是MYH10的候选作用蛋白。检测发现MYH10敲减仅下调SNAIL的蛋白水平（图1a-b）。CoIP实验发现MYH10与SNAIL互作（图1c）。MYH10是否通过抑制SNAIL的泛素化减少其降解呢？使用anti-SNAIL进行IP实验，使用anti-UBC进行WB检测，结果发现MYH10显著降低SNAIL的泛素化水平（图1d）。并且MYH10敲低能减少CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图1e）。表明MYH10与SNAIL互作，影响SNAIL蛋白的稳定性。全文分享请查阅：【《Adv Sci》解读：泛素化机制还可以这样做！MYH10招募去泛素化酶USP45，抑制SNAIL泛素化降解，促进卵巢癌顺铂耐药】。如有泛素相关科研问题，欢迎来询探讨。 #泛素化修饰#⠂ #WB#⠂ #coip实验#⠂ #文献#⠂ #实验代做#

AKT如何调控其蛋白稳定性？第一步，TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的蛋白酶体抑制剂MG132以浓度依赖的方式增强TRPML1的蛋白丰度，而BafaA1对TRPML1没有影响，表明TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的（图1a）。第二步，TrCP可能是TRPML1泛素化的主要E3连接酶 Co-IP实验显示，TrCP过表达上调TRPML1泛素化水平，TrCP 的失活体则不能（图1c）；此外，下调TrCP可降低TRPML1泛素化水平（图1d）。另外，Co-IP分析发现，K48R泛素突变体破坏了TRPML1的多泛素化，而K63R突变体则没有。此外，TrCP过表达后，K48相关的TRPML1泛素化增加（图1e-f）。表明TRPML1主要通过K48连接泛素化。综上，TrCP可能是TRPML1泛素化的主要E3连接酶，通过lys48连接的多泛素链对TRPML1进行蛋白酶体降解。第三步，探索S343磷酸化对K48连接的泛素化和TRPML1蛋白酶体降解的影响 Co-IP实验发现，TRPML1-S343D激活突变体抑制了TRPML1与TrCP的互作，而S343A失活突变体促进了这种互作（图1g）。Co-IP还发现，S343D突变体抑制TRPML1的泛素化，而S343A失活突变体增强泛素化（图1h）。另外，TrCP敲除延长了TRPML1-S343A的半衰期（图1i），表明S343磷酸化抑制了TrCP介导的K48泛素化和TRPML1的蛋白酶体降解。第四步，确定TRPML1中哪些赖氨酸残基可能被泛素化采用预测系统软件预测TRPML1的潜在泛素化位点，包括K55、K59、K62、K65、K219、K224、K227、K378和K552。构建野生型和潜在泛素化位点失活突变体【备注：泛素化失活突变体，赖氨酸(K)转精氨酸(R)】，进行Co-IP分析。发现K552R突变抑制了TRPML1的K48连锁泛素化（图1j），表明TRPML1K552位点泛素化；另外，TrCP无法促进TRPML1-K552R泛素化（图1k）。CHX脉冲追踪实验发现外源表达的TRPML1-K552R在CHX处理后比野生型TRPML1更稳定（图1l）。表明AKT通过直接磷酸化TRPML1的Ser343位点，抑制K552泛素化和TRPML1的蛋白酶体降解，从而增强溶酶体胞吐作用。 #科研#⠂ #磷酸化#⠂ #泛素化#

如何确定下游的蛋白分子？初步确定下游的蛋白分子通过WB检测铁死亡相关蛋白，发现敲低显著降低GPX4蛋白的表达（图1a-b）,但不影响其RNA水平（图1c）。同样抑制剂亦能降低GPX4的蛋白水平（图1d）。构建GPX4 WT及其酶促失活突变体U46S进行功能实验，证实过表达GPX4 WT蛋白在抑制RSL3诱导的铁死亡方面具有功能（图1e）。放线菌酮(CHX)试验表明，敲低USP8缩短GPX4蛋白的半衰期（图1f）。表明USP8可能作为一种去泛素化酶在翻译后水平调节GPX4的蛋白丰度。蛋白酶体介导的降解系统和自噬-溶酶体系统是调控蛋白质稳态的两大系统。而实验表明蛋白酶体抑制剂MG132挽救了敲减USP8介导的GPX4不稳定，而溶酶体抑制剂巴弗洛霉素A1 (BafA1)和氯喹(CQ)则无此作用（图1g），表明USP8介导的GPX4稳态调节取决于蛋白酶体系统。全文分享可查阅：【《PNAS》解读：去泛素化修饰-顺序渐进-刨根问底。去泛素化酶USP8靶向铁死亡提高肿瘤免疫治疗的机制】。如有相关机制研究，欢迎留言探讨。 #科研#⠂ ⠣泛素化修饰#⠂ ⠣wb实验#⠂ ⠣实验外包#⠂ #研究生#

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