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actin权威发布_actin蛋白大小(2024年11月动态更新)

内容来源：方新你好影院所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

actin

integrin (整联蛋白) 属整合蛋白家族, 是细胞外基质受体蛋白。是一种跨膜的异质二聚体, 它由两个非共价结合的跨膜亚基, 即’Œ𚚥Ÿ𚦉€组成。细胞外球形结构域是一个头部露出脂双分子层约 20nm。头部可同细胞外基质蛋白结合, 而细胞内的尾部同肌动蛋白相连。整联蛋白的两个亚基, ’Œ“𞩃𝦘麟–基化的, 并通过非共价键结合在一起。整联蛋白同基质蛋白的结合需要二价阳离子, 如 Ca2+ 、Mg2+ 等的参与。有些细胞外基质蛋白可被多种整联蛋白识别。

WB内参选择指南：灵活运用，事半功倍 𐟚€ 在进行蛋白质印迹（Western Blot）实验时，选择合适的内参至关重要。内参是实验中的“稳定分子”，用于标准化目标蛋白的相对表达量。以下是不同实验条件下内参选择的建议：细胞骨架相关蛋白：如果研究的是与细胞骨架相关的蛋白，如肌动蛋白（Actin），那么肌动蛋白（actin）可能不是最佳选择，因为它在细胞骨架重组时可能会受到影响。可以考虑使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）或线粒体蛋白作为内参。细胞分裂与凋亡相关蛋白：对于研究细胞分裂或凋亡相关蛋白的实验，选择与细胞周期相关的内参，如cyclin B或Mcl-1，可能更为合适。诱导后或修饰型蛋白：在进行诱导处理或检测磷酸化、乙酰化等修饰型蛋白时，建议选择结构蛋白如肌动蛋白（actin）和微管蛋白（tubulin）作为内参。因为GAPDH是代谢类蛋白，其表达量可能会受到诱导处理的影响。分泌型样本：在检测血浆、乳汁、组织液等分泌样本时，由于这些样本没有完整的细胞结构，可以选择分泌型蛋白如转铁蛋白（Transferrin）作为内参。抗癌与真菌药物：在使用抗癌和真菌药物时，由于tubulin的表达可能会受到影响，因此不适合作为内参。多组织多细胞样本：在进行多组织多细胞样本对比时，建议选择GAPDH作为内参。因为GAPDH是代谢类蛋白，在活组织中的表达较为恒定，而肌动蛋白（actin）和微管蛋白（tubulin）等结构蛋白在不同组织的表达可能会有差异。细胞核内参：PCNA是细胞核的内参蛋白，在DNA S期表达，因此对于非增殖细胞不推荐使用。通过灵活运用这些内参选择建议，可以提高实验的准确性和可靠性，让你的研究更加深入和全面。

内参双条带在进行Western Blot（WB）实验时，内参actin出现两条带的现象可能让许多研究者感到困惑。以下是一些可能的原因及解决方法，帮助你更好地理解这一现象： actin的降解𐟌€ actin是细胞骨架的主要成分，分子量为42 kDa。在细胞凋亡过程中，actin可能会被降解，形成38-41kDa的片段。这种降解可能会导致在WB实验中出现两条带。 IL-1š„切割𐟔ꊠ 有研究表明，IL-1ƒ𝥤Ÿ切割actin。如果你的实验中IL-1𐴥𙳨𞃩똯𜌥糖𝤼š观察到两条带。这种情况下，需要具体分析实验条件，确认是否有IL-1š„激活。非特异性结合𐟔— 多克隆抗体的非特异性结合也可能导致两条带的出现。这种情况下，两条带的强度可能不同。尝试通过反复使用WB来消耗掉非特异结合，或者降低抗体稀释度（例如从1:500到1:2000或1:5000）。电泳液和转膜液pH异常𐟌᯸ 电泳液和转膜液的pH值异常也是导致actin出现两条带的原因之一。确保所有溶液的pH值严格控制，可以解决这个问题。曝光时载物台移动𐟓𘊠 在曝光过程中，如果载物台不平或者ECL显影液覆盖膜，可能会导致膜随着液体流动，从而产生两条带。二硫键的存在𐟔— 在某些情况下，细胞裂解液中使用的巯基乙醇可能无法完全破坏二硫键，导致actin出现两条带。这种情况下，可以在细胞裂解液中加入10mM的DTT来解决。其他原因𐟔 抗体浓度过高、孵育温度过高或孵育时间过长也可能导致actin出现两条带。尝试调整这些条件，看看是否能解决问题。通过以上方法，你应该能够找到actin出现两条带的原因，并采取相应的措施来解决这个问题。

动物实验中的抗体检测问题及解决方法在进行动物实验时，我们使用了CST加的抗体，特别是针对PI3K的抗体，稀释比例为1:2000。电泳条件为80V30分钟和120V30分钟，转膜时间为1小时10分钟。实验过程中，我们发现同一张膜上的actin和AKT都有条带，而另一张膜上的PI3K条带较少。如图二所示，我们怀疑抗体在洗涤过程中被洗掉了，或者蛋白在实验过程中被降解了。此外，我们还发现目的蛋白和actin之间的条带有时会跑偏，导致剪膜时容易剪到目的条带。为了解决这些问题，我们尝试了以下方法：调整电泳条件，尝试使用不同的电压和时间组合，以避免目的蛋白和actin之间的条带重叠。优化抗体浓度，尝试使用更高或更低的抗体浓度，以获得更清晰的条带。改进转膜条件，尝试使用不同的转膜时间和温度，以提高转膜效率。尝试使用不同的封闭剂，如BSA或脱脂奶粉，以减少非特异性结合。我们希望这些方法能帮助我们解决实验中的问题，获得更准确的实验结果。如果有其他科学家有类似的经验或建议，欢迎分享！

𐟤”WB实验actin双带之谜 𐟧在WB实验中，你是否遇到过内参actin显示两条带的情况？这可能是由多种原因导致的，让我们一起来揭秘！ 1️⃣ 降解的actin：细胞凋亡时，actin可能被降解，形成38-41kDa的片段，这在WB上表现为两条带。 2️⃣ IL-1ˆ‡割：实验中IL-1š„激活可能导致actin被切割，从而产生两条带。 3️⃣ 非特异性结合：多克隆抗体可能与actin非特异性结合，导致两条强度可能不同的条带。尝试降低抗体浓度或改变抗体稀释度可能有助于解决这个问题。 4️⃣ pH异常：电泳液和转膜液的pH值异常也可能导致actin出现两条带。严格控制溶液的pH值可以避免这个问题。 5️⃣ 曝光问题：如果曝光时载物台移动，可能导致actin条带偏移，形成两条带。确保曝光时载物台稳定是关键。 6️⃣ 二硫键存在：细胞裂解时使用的巯基乙醇可能无法完全破坏二硫键，导致actin出现两条带。加入DTT可以解决这个问题。 7️⃣ 抗体浓度、孵育条件不当：过高的抗体浓度、过高的孵育温度或过长的孵育时间也可能导致actin出现两条带。优化这些条件可能有助于改善结果。 𐟔现在，你是否对WB实验中actin出现两条带的原因有了更深入的了解呢？如果还有其他问题，欢迎在评论区交流讨论哦！

内参孵育时间几小时在进行Western blot（WB）实验时，选择合适的内参蛋白至关重要。内参蛋白可以帮助校正样品之间的变异和负载量的差异，从而准确比较目标蛋白的表达水平。以下是一些选择内参蛋白的依据：样本来源和稳定性 𐟌🰟› 确定研究样本的来源（动物或植物）及其稳定性要求。根据样本来源选择合适的内参蛋白：动物样本 actin：广泛表达的内参蛋白，稳定性好。 GAPDH：糖酵解途径中的酶，稳定性好。 Tubulin：细胞骨架的主要组成部分，稳定性好。植物样本 Rubisco：光合作用中的关键酶，稳定性好。 Actin：植物中也存在，稳定性好。 GAPDH：在植物细胞中广泛表达，稳定性好。基本表达水平 𐟓Š𐟔⊩€‰择在所研究样品中基本表达水平稳定的蛋白作为内参。这些蛋白通常是细胞基本生理功能所必需的，如GAPDH、actin、Tubulin等。确保内参蛋白的表达水平在不同实验条件下保持稳定。细胞定位 𐟓𐟔 选择在所研究细胞类型中广泛表达且定位稳定的蛋白作为内参。这可以减少不同细胞类型之间的变异，并确保内参蛋白在不同细胞或组织中的表达水平相对稳定。与目标蛋白无关 𐟚밟Žᮤ🝩€‰择的内参蛋白与研究的目标蛋白无关，以避免相互干扰。选择与目标蛋白无关的蛋白作为内参，如GAPDH。验证内参蛋白 𐟔찟“ˆ 在选择内参蛋白之前，最好进行一些初步实验和验证。可以通过WB实验或其他方法检测内参蛋白的表达水平，并确保其在不同实验条件下保持稳定。文献支持 𐟓š𐟔 查阅文献了解其他研究中使用的内参蛋白和抗体，及其在特定研究领域的可靠性和稳定性。根据文献建议选择合适的内参抗体。通过以上步骤，你可以更好地选择适合你实验的内参蛋白，从而提高实验的准确性和可靠性。

内参选择在进行Western blot实验时，选择合适的内参至关重要。以下是选择内参时需要考虑的几个关键因素：蛋白表达丰度：内参应在样本中稳定表达，且表达量相对较高，以确保能够有效地检测到内参信号。分子量：内参的分子量应与目标蛋白的分子量有明显差异，以便在电泳分离时能够分开。细胞类型和组织特异性：根据实验样本类型，选择适合的内参。例如，actin常用于哺乳动物细胞，而Tubulin则更适合检测细胞骨架蛋白。推荐使用一些常见的内参，如actin、GAPDH和HSP90。这些内参在大多数细胞类型中都有稳定表达，且分子量适中，容易检测。在选择内参时，还需要注意一些实验细节。比如，确保内参和目标蛋白的抗体不相互干扰，并且在实验中正确地设置对照组，以验证内参的表达是否稳定。

𐟧엂实验内参选择指南𐟧튥œ藂实验中，选择合适的内参至关重要。以下是一些建议来帮助你做出明智的选择： 𐟔 考虑蛋白表达丰度：内参应在样本中稳定且高表达，这样才能清晰地检测到信号。 𐟓 关注分子量：内参的分子量应与目标蛋白有明显差异，便于电泳分离。 𐟧젩’ˆ对细胞类型和组织：根据实验样本类型挑选合适的内参，如actin适合哺乳动物细胞。 𐟌Ÿ 推荐使用actin、GAPDH和HSP90等内参，它们在多种细胞中稳定表达，分子量适中，易于检测。 𐟔젦𓨦„实验细节：确保内参抗体与目标蛋白抗体不干扰，并设置对照组以验证内参稳定性。选择合适的内参，让你的WB实验更加准确可靠！𐟒ꀀ

内参基因选择指南：不同样本类型的最佳选择内参基因是指在大多数样品类型中普遍表达，其丰度通常不受生物条件变异影响的基因。选择内参基因需要遵循以下原则：高度或中度表达：内参基因的表达水平应相对稳定，不能过高或过低。表达稳定：在不同条件下，内参基因的表达量应保持一致。不同样本类型选择不同的内参基因：针对不同的样本类型，需要选择合适的内参基因。典型的内参基因包括GAPDH、actin、tubulin、histone 3、vinculin等稳定蛋白。哺乳动物组织常用内参基因：如actin、GAPDH、PCNA、Lamin、Histone H3等。植物组织常用内参基因：如Plant actin、Rubisco等。细胞内（细胞质/全细胞、线粒体、细胞核、细胞膜）常用内参基因：如actin和tubulin不适用于细胞核提取物，而GAPDH不用于氧相关研究。 ⚠️关于不同样本类型内参的选择：哺乳动物组织：常用的内参基因有actin、GAPDH、PCNA、Lamin、Histone H3等。植物组织：常用的内参基因有Plant actin、Rubisco等。细胞内（细胞质/全细胞、线粒体、细胞核、细胞膜）：actin和tubulin不适用于细胞核提取物，而GAPDH不用于氧相关研究。在选择内参基因时，需要根据具体的实验条件和样本类型进行选择，以确保实验结果的准确性。

𐟧엂内参抗体选择指南𐟓– 𐟔 做过WB实验的小伙伴们，你们是否在选择内参抗体时感到迷茫呢？别担心，这篇指南将帮你轻松搞定！ 𐟒ᠥ†…参抗体，也就是内部参照抗体，是WB实验中不可或缺的一部分。它能帮助我们判断实验流程是否正常、各组样本上样量是否一致以及目标蛋白的表达水平是否存在差异。 𐟔 那么，如何选择合适的内参抗体呢？以下是一些建议： 1️⃣ 考虑样本种属来源：哺乳动物组织或细胞样本通常选择actin、tubulin等；其他稀少物种则可参照文献或选择高度保守的管家基因表达的蛋白作为内参。 2️⃣ 考虑目的蛋白分子量：选择与目的蛋白分子量相差5kDa以上的内参，如目的蛋白为45kDa，可选择GAPDH或tubulin作为内参。 3️⃣ 针对目的蛋白表达部位：检测一般蛋白质时，GAPDH、actin等可满足需求；若检测亚细胞器蛋白，则应选择对应的亚细胞器内参，如核内参抗体Lamin A、Lamin B等。 𐟓 另外，还需要注意一些特殊情况：如某些细胞或组织缺氧时，GAPDH表达量可能增高，此时不宜作为内参；涉及细胞增殖实验时，c-Jun不宜作为内参；凋亡实验中，TBP、Lamin等核内参可能不适宜。 𐟎‰ 现在，你是否对WB内参抗体的选择有了更清晰的了解呢？赶快试试吧！

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